lncRNA與microRNA的靶點(diǎn)驗(yàn)證

 

lncRNA的作用機(jī)制有很多，以ceRNA（competing endogenous RNA，競(jìng)爭(zhēng)性的內(nèi)源RNA）形式發(fā)揮功能是其中的一種，即lncRNA與靶基因的3’UTR競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合相同的microRNA，降低microRNA對(duì)靶基因的抑制功能，從而上調(diào)靶基因的表達(dá)量。為了檢測(cè)其效果，我們可以用Western Blot檢測(cè)靶蛋白的表達(dá)水平，也可以用qRT-PCR檢測(cè)靶基因的表達(dá)。但是這兩種方式都無(wú)法確定lncRNA是否通過(guò)ceRNA方式調(diào)控靶基因的表達(dá)。因此，我們可以通過(guò)“microRNA與lncRNA結(jié)合驗(yàn)證”，“microRNA與靶基因結(jié)合驗(yàn)證”和“lncRNA與靶基因3’UTR競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合microRNA驗(yàn)證”實(shí)驗(yàn)，構(gòu)建Sensor reporter并進(jìn)行活性檢測(cè)，對(duì)lncRNA，microRNA與靶基因這三者間的作用機(jī)制作出準(zhǔn)確判斷。

 

 

服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

 

（1）利用專(zhuān)業(yè)軟件進(jìn)行miRNA與lncRNA和靶基因3’UTR區(qū)的結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè)；

（2）采用Promega公司特有psiCHECK質(zhì)粒；

（3）所采用的Luciferase雙熒光報(bào)告系統(tǒng)，可以獲得寬泛的線(xiàn)性定量范圍與極高的靈敏度；

（4）采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染技術(shù)，操作簡(jiǎn)便、快速，周期短，適用于絕大多數(shù)細(xì)胞類(lèi)型。

 

 

服務(wù)流程：

 

一、microRNA與lncRNA結(jié)合驗(yàn)證

（1）直接合成靶lncRNA序列或microRNA在靶lncRNA上的結(jié)合位點(diǎn)序列；

（2）將上述合成的DNA片段克隆至報(bào)告基因載體psiCHECK質(zhì)粒；

（3）購(gòu)買(mǎi)microRNA mimics；

（4）將報(bào)告載體與microRNA mimics共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞；

（5）多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)報(bào)告基因的表達(dá)水平；

（6）數(shù)據(jù)分析，整理提交客戶(hù)原始數(shù)據(jù)及項(xiàng)目報(bào)告；

 注：為了實(shí)驗(yàn)的嚴(yán)謹(jǐn)性，可加入靶lncRNA序列中microRNA預(yù)測(cè)結(jié)合區(qū)域的突變體作為對(duì)照，進(jìn)一步說(shuō)明問(wèn)題。

 

二、microRNA與靶基因結(jié)合驗(yàn)證

（1）直接合成靶基因3’UTR序列或microRNA在靶基因3’UTR上的結(jié)合位點(diǎn)序列；

（2）將上述合成的DNA片段克隆至報(bào)告基因載體psiCHECK質(zhì)粒；

（3）購(gòu)買(mǎi)microRNA mimics；

（4）將報(bào)告載體與microRNA mimics共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞；

（5）多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)報(bào)告基因的表達(dá)水平；

（6）數(shù)據(jù)分析，整理提交客戶(hù)原始數(shù)據(jù)及項(xiàng)目報(bào)告；

 注：為了實(shí)驗(yàn)的嚴(yán)謹(jǐn)性，可加入靶基因3’UTR區(qū)microRNA預(yù)測(cè)結(jié)合區(qū)域的突變體作為對(duì)照，進(jìn)一步說(shuō)明問(wèn)題。

 

三、lncRNA與靶基因3’UTR競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合microRNA驗(yàn)證

（1）直接合成靶基因3’UTR序列或microRNA在靶基因3’UTR上的結(jié)合位點(diǎn)序列；

（2）將上述合成的DNA片段克隆至報(bào)告基因載體psiCHECK質(zhì)粒；

（3）直接合成lncRNA序列，構(gòu)建lncRNA過(guò)表達(dá)質(zhì)粒；

（4）將報(bào)告載體與lncRNA表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞；

（5）多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)報(bào)告基因的表達(dá)水平；

（6）數(shù)據(jù)分析，整理提交客戶(hù)原始數(shù)據(jù)及項(xiàng)目報(bào)告；

 注：為了實(shí)驗(yàn)的嚴(yán)謹(jǐn)性，可加入靶基因3’UTR區(qū)microRNA預(yù)測(cè)結(jié)合區(qū)域的突變型報(bào)告載體及lncRNA序列中microRNA預(yù)測(cè)結(jié)合區(qū)域的突變型表達(dá)載體作為對(duì)照，進(jìn)一步說(shuō)明問(wèn)題。

單位介紹

• 漢恒生物科技（上海）有限公司是國(guó)內(nèi)首家專(zhuān)業(yè)從事腺相關(guān)病毒（AAV）載體研究和開(kāi)發(fā)的公司，成立于2010年。擁有一支由博士和碩士為主50多人的優(yōu)秀研發(fā)團(tuán)隊(duì)，擁有全面的AAV血清型體系，完善的AAV光遺傳原件庫(kù)，快速表達(dá)的scAAV體系和AAV衍生的在體應(yīng)用工具，開(kāi)發(fā)了自噬流研究工具、分子載體探針、Crispr基因編輯等基因及信號(hào)通路研究工具，積累了上千個(gè)病毒項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)，是國(guó)內(nèi)唯一一家擁有AAV-saCas9在體編輯工具和AAV-LC3在體自噬流檢測(cè)工具的公司。公司建立了ISO9001質(zhì)量管理體系，擁有發(fā)明專(zhuān)利1項(xiàng)，申請(qǐng)發(fā)明專(zhuān)利5項(xiàng)。

單位資質(zhì)

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